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多功能柱净化高效液相色谱法

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多功能柱净化高效液相色谱法

发布日期:2021-12-15 编辑: 点击:

1.原理

样品中的黄曲霉毒素B1.黄曲霉毒素B2.黄曲霉毒素G1.黄曲霉毒素G2用乙腈一水(84+16)提取,过滤稀释后用多功能柱净化。净化液吹干后,加入流相定量,用液相色谱器测量各种黄曲霉毒素的含量,用外标法测量。

2.试剂和材料。

甲醇(液相色谱纯).乙腈(色谱纯).硝酸(65%).溴化钾.ued在线(My-coseP226)。

黄曲霉毒素B1.黄曲霉毒素B2.黄曲霉毒素G1.黄曲霉毒素G2标准产品。黄曲霉毒素B1.黄曲霉毒素Gl2.0μg/L,黄曲霉毒素B2.黄曲霉毒素G20.5μg/L溶于乙腈。

标准储备溶液:以乙腈稀释至10.0ml为标准储备溶液,准确取出上述1.0ml黄曲霉毒素标准溶液。标准工作液:以乙腈稀释至10.0ml为标准工作液,准确取出上述黄曲霉毒素标准储备溶液。

3.仪器

称重平衡。高速均质器。高效液相色谱仪(荧光探测器)。柱后衍生装置。真菌毒素蒸发器。均质器。色谱柱(C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,填料直径5μm)。

4.测量步骤。

(1)在500毫升具塞锥形瓶中加入100毫升乙腈一水(84+16,体积)提取物约25g(准确至0.1g),用均质器高速搅拌提取3min过滤。

(2)在多功能柱净化吸取约55ml滤液和人多功能柱的试管中,将MFC柱套管放入试管中。慢慢将套管推到试管底部,使提取物通过MFC柱进入套管。将1.0ml净化液从套管中准确移除到5ml棕色小瓶中。在50℃下吹干。HPLC分析使用过0.45μm滤膜。

(3)测定

①色谱条件色谱柱:15cm×4.6mm(内径)、5μm、LichroCARTC18柱。流动相甲醇-乙腈-水(215+215+570,体积),每升加入120mg溴化钾和200μL硝酸,流速1.0ml/min。检测条件:刺激波长365nm,发射波长440nm。进样量:100bμL(样液)。柱后衍生装置:100μA。

②色谱测定通过程序进样取出适量的标准储备溶液,稀释成5种不同浓度的标准工作液。黄曲霉毒素B1。黄曲霉毒素B2。黄曲霉毒素Gl。黄曲霉毒素G2的响应值和相当于样品中黄曲霉毒素含量的线性方程,并处理样品的色谱数据。在上述色谱条件下,黄曲霉毒素B1。黄曲霉毒素B2。黄曲霉毒素G2。黄曲霉毒素G2衍生物的保留时间约为3.5min:4.2min.4.7min.5.7min。


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